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灵芝多糖类的纯化方法

2013-01-15 13:51:58    来源:仙芝楼    浏览:194次
    除去游离蛋白质及小分子杂质后得到灵芝总多糖类,它含有多糖和多糖肽多个均一体,分子量分布范围较宽,不适宜进行化学结构分析,需进一步分离纯化得到分子量分布范围较窄的单一组分,才能进行深入的化学结构研究。灵芝多糖类常用的纯化方法有分级沉淀法、凝胶柱层析法、离心交换层析和超滤技术扥,实际操作中常常是几种方法配合使用,才能达到较好的分离纯化效果。


    (一)分级沉淀法


    依据不同分子大小的灵芝多糖(肽)在不同浓度的醇(甲醇或乙醇)中溶解度不同,依次沉淀析出。可将灵芝总多糖类配制成合适的水溶液(1%~3%),离心弃去杂质。


    (二)离子交换层析


    用于灵芝多糖类离子交换层析的交换剂有弱碱性阴离子交换剂,主要有以下几种:


    1.DEAE-纤维素  DEAE-纤维素分离灵芝多糖类是常见的方法之一。其优点是:它是开放性长链,具有较大的表面积,吸附容量大;其次是具有良好的稳定性,洗脱剂的选择范围广,第三离子基团少,排列稀疏,与多糖类结合不太牢固,易于洗脱。


    2.DEAE-葡聚糖凝胶  葡聚糖凝胶离子交换剂具有离子交换和分子筛的双重作用,对灵芝多糖类有很高的分辨率。


    3.DEAE-琼脂糖凝胶 适合相对分子量较大多糖的分离,即使加快流速,也不影响分辨率。适用于灵芝多糖类的离子交换剂常采用的类型为DEAE-Sepharose 4B和6B。


    (三)凝胶层析法


    用于灵芝多糖肽分离的凝胶有葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。


    (四)超滤技术


    超滤法是综合了过滤和透析技术的优点而发展起来的一种高效分子分离技术。是灵芝多糖类脱盐、浓缩、分级分离常用的方法。