• 咨询热线:400-8899-773/0591-83053397
  • 中文 | EN

首页 > 养生科普 > 灵芝菌种分离,灵芝孢子分离法

灵芝菌种分离,灵芝孢子分离法

2013-01-15 13:40:22    来源:仙芝楼    浏览:195次
从灵芝子实体中收集成熟的有性担孢子,并将其培养萌发成纯菌丝的方法。由孢子分离得到的菌丝具有菌龄短、生活力强,同时有性孢子具有双亲的遗传特性,是选育新菌株和杂交育种的材料。但是孢子分离污染率高,经及时清理污染的试管。

1.孢子的采集 以赤芝为例,选取个体典型、菌盖呈红褐色、有光泽、发育成熟、无白色生长圈,瓶(袋)上见有少量散落孢子粉,大小适中,无病虫害的子实体,切去菌柄,用棉球蘸取0.1%升汞溶液,反复擦拭菌盖正反面,菌孔一面宜轻,然后用无菌水充分冲洗,并以无菌纱布吸干水分。孢子采集方法有以下几种。

(1)弹射法 在无菌条件下,用灼烧后的粗注射针将切去灵芝菌柄处钻1个深达菌肉的小孔,插在培养皿的铁丝架上,培养皿放在铺有纱布的搪瓷盆内,外罩上钟罩或无底蘑菇瓶,置28-30℃相对湿度90%的条件下培养。当有大量褐色孢子落入培养皿后,除去钟罩及支架,将培养皿盖好,并用透明胶带封贴或无菌纸包扎备用。所用器材均需事先用纸包扎灭菌并进行无菌操作。

(2)贴附法 锥形瓶(即三角烧瓶)内分装入1厘米厚的PDA培养基,加棉塞灭菌,冷却成平板。无菌条件下将去柄的子实体如上述作表面消毒处理,放在无菌纸上,沿菌管方向切若干个小块,然后拔出锥形瓶塞,将子实体小块的皮壳部蘸上胶水粘贴在棉花塞底部,塞回锥形瓶口上。置28-30℃下培养,见有棕色孢子下落在培养基表面,即可在无菌条件下除去棉塞上的菌块。

贴附法也可粘贴在试管斜面正上方的管壁上。若菌盖厚可削去部分皮壳和菌肉,见斜面上散落有灵芝孢子时,除去菌块。

2.苗丝培养 在无菌条件下,把弹射法收集到的孢子,用接种环蘸取少许抖落在斜面上,或将孢子少许放入试管内无菌水中(采用20%灵芝子实体煮汁更理想)制成孢子悬液,然后蘸涂在斜面或平板上,置28-30℃下培养。贴附法在平板或斜面上接收的孢子,可直接适温下培养,约1周,待孢子萌发后,挑取萌发早、长势旺的菌落,移接至新斜面上,经培养即为母种。

野外分离灵芝孢子时因条件限制,可将菌肉(带菌管)贴在试管壁上,待孢子弹射入培养基后及时转管。

孢子萌发后先形成一级菌丝,几天后便可形成二级菌丝。如果在显微镜下观察到锁状联合,一般可确定为得到了灵芝菌丝。